Vnitřní lékařství 7/2020

PŘEHLEDOVÝ ČLÁNEK Biomarkery pro neendoskopické vyšetření sliznice jícnu E16 | VNITŘNÍ LÉKAŘSTVÍ / Vnitř Lék 2020; 66(7): e13–e19 /  www.casopisvnitrnilekarstvi.cz genu pro tento nádorový supresor lze využít techniky založené na PCR i NGS. Genetické změny typické pro nádorové buňky mohou být užitečným prognostickýmmarkerem, slouží k hodnocení „low“ a „high grade“ dysplazií (LGD a HGD). Mutační analýzu genu TP53 zprostředko- vává např. Oddělení lékařské genetiky FN Brno (18). Epigenetické biomarkery v kombinaci s neendoskopickými metodami Epigenetické alterace sice nezasahují do primární sekvence mo- lekuly DNA, nicméně mohou významně ovlivňovat genovou expresi a v konečném důsledku i koncentraci proteinu, který kódují (Obr. 4) (16). K identifikaci hypermetylovaných genů lze využít systém Illumina 27k array, díky kterému jsme schopni kvantifikovat úroveň metylace ve specifických lokusech genomu (19), nebo lze sekvenovat celý metylom (20). Výsledky získané sekvenováním DNA ze zdravé dlaždicové tkáně jícnu jsou následně porovnávány se vzorky BE (19). Tímto způsobem byly analyzovány metylace genů pro faktor výměny guanidinových nukleotidů (VAV3), transkripční faktor Twist-related protein 1 (TWIST1), regulátor buněčného cyklu cyklin A1 (CCNA1) a vimentin (VIM) a shledány jako vhodné biomarkery pro BE (15, 19, 20). V souvislosti s BE byly dále studovány hypermetylace a s nimi spo- jené inaktivace proapoptických genů jako Runt-related transkripční faktor 3 (RUNX3), genů zapojených do kontroly buněčného cyklu jako cyklin dependentní kináza p16 nebo reparace DNA a tumor- -supresorových genů, jako jsou myoblast determinující protein 1 (MYOD1), protein kináza C-vázající protein (NELL1), A-kináza ukotvující protein 12 (AKAP12) nebo protachykinin 1 (TAC1) (21). Dále z rodiny tumor-supresorových genů byly analyzovány metylace genů pro některé proteiny se strukturními motivy zinkových prstů (ZNF). Tyto proteiny jsou díky své struktuře schopny interakce s DNA, RNA i jinými proteiny a podílejí se tak na transkripční regulaci, ubikviti- nem zprostředkované degradaci proteinu, transdukci signálu, migraci buněk a opravě DNA. Navíc bylo zjištěno, že mohou být zapojené jak do karcinogeneze, tak do tvorby metastáz (22). V procesu metastazování, tedy uvolnění nádorových buněk z pri- márního ložiska, je zapotřebí degradace extracelulární matrix, na které se podílejí různé druhy proteináz. Inhibitor cesty tkáňového faktoru 2 (TFPI2) vykazuje silnou inhibiční aktivitu proti celé řadě těchto proteináz, tím chrání extracelulární matrix proti degradaci a s ní spojenou migraci nádorových buněk. TFPI2 je často metylován u karcinomu jícnu (23). Biomarkery exprese genů v kombinaci s neendoskopickými metodami Mezi tyto biomarkery můžeme zařadit méně studované exprese mRNA a miRNA, k jejichž analýze se využívá expresních čipů nebo RNA sekvenování (16). miRNA jsou malé nekódující molekuly RNA, které rozpoznají cí- lovou sekvenci mRNA a inhibují tak překlad mRNA do proteinu (24). Kromě toho jsou profily miRNA úzce spojovány se specifickou tkání nebo onemocněním a v biologických vzorcích jsou vysoce stabilní. Například ve vzorcích jícnu odebraných neendoskopickými metodami byly s BE asociovány miR-192, miR-194, miR-196a a miR-215 (Obr. 5) (12). Problematice miRNA v kontextu s GERD se v České republice věnuje tým prof. Slabého, který v endoskopicky odebrané tkáni BE i EAC zazna- menal signifikantně zvýšenou expresi miR-192 a miR-194 v porovnání s normální jícnovou tkání (25). Proteinové a peptidové biomarkery v kombinaci s neendoskopickými metodami Ke stanovení koncentrace proteinového biomarkeru ve vzorku jíc- nové tkáně je nejčastěji využívána technika IHC, tedy barvení proteinu specifickými protilátkami. Pro posouzení dysplazie u pacientů s BE doporučuje Britská gastroenterologická společnost IHC vyšetření výše zmíněného proteinu p53 (26). Dalšími studovanými biomarkery v souvislosti s needoskopickými metodami jsou peptidy z  rodiny trifolátového faktoru (TFF). Rodina je tvořena třemi peptidy TFF1, TFF2 a TFF3 vyskytujícími se v buňkách Obr. 4. Genetické a epigenetickémarkery pro BE v kombinaci s neendoskopickýmodběremvzorků sliznice jícnu (vytvořeno pomocí programu BioRender.com) ostatní geny TFPI2, VAV3, VIM transkripční faktory TWIST1, RUNX3 regulátory buněčného cyklu a opravy DNA CCNA1, p16 tumor-supresorové geny MYOD1, NELL1, AKAP12, TAC1, ZNF569, ZNF682, ZNF345 mutace TP53 mRNA